No artigo os pesquisadores utilizaram um tampão fosfato pH 7,4 para trabalhar com células da bactéria R. rickettsii. Faço o seguinte desafio a vocês, encontrem outros sistemas tampões que poderiam ser utilizados nesse método em substituição ao tampão fosfato, justifiquem a escolha. Outro pesquisador quis repetir este experimento utilizando um tampão pH 10, que tampão você indicaria a este pesquisador?
Dica: você precisará avaliar os pKas de um lista de ácidos para refletir sobre este problema.
Título do Artigo: Isolamento de Rickettsia em cultura de células vero
Objetivo: padronizar um método de
crescimento da R. rickettsii em cultura de
células.
"Para a análise quantitativa dos extratos sobre as culturas
celulares utilizamos o método descrito por Murakami et al(22).
Resumidamente, 100 µl de uma suspensão de células Vero contendo
1,0 x 106
células/ml em meio Ham-F10 com 10% de SFB
foram inoculadas em uma placa de cultura com 96 poços
(Corning®, Cambridge, MA, USA) e cultivadas por 12 h nessas
condições a 37ºC. Após este período de incubação o meio de
cultivo foi removido e foi adicionado a cada poço 100 µl de meio
novo com os extratos de F6H8
. Após 12 horas de incubação a
37ºC os extratos foram removidos e as células foram lavadas
com 0,1 ml de tampão fosfato salino em pH 7,4 a
37ºC, fixadas em formalina 10% por 15 minutos, lavadas em PBS
pelo mesmo tempo e coradas por cristal violeta 0,05% (em
metanol 20%) por 15 minutos..."
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